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系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者淋巴細(xì)胞凋亡的研究

中華皮膚科雜志1998年第1期第31卷論著

作者：石成鋼；尹培達(dá)；劉亞光；董秀清

單位：510080廣州，中山醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕內(nèi)科

關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡；系統(tǒng)性；淋巴細(xì)胞；細(xì)胞凋亡

【摘要】目的研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者(SLE)淋巴細(xì)胞凋亡情況以及自身抗體產(chǎn)生的關(guān)系。方法通過(guò)分離出淋巴細(xì)胞，在12孔板內(nèi)培養(yǎng)0、24、48小時(shí)，用吖啶橙染色，于熒光顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。結(jié)果22例SLE患者的淋巴細(xì)胞凋亡率較16例正常對(duì)照組在培養(yǎng)24、48小時(shí)時(shí)有顯著增高(P均〈0.01)。SLE患者伴有2種以上自身抗體陽(yáng)性者，培養(yǎng)24、48小時(shí)具有更高的淋巴細(xì)胞凋亡率(P〈0.05和P＜0.01)。結(jié)論SLE患者淋巴細(xì)胞在體外凋亡加速，可能與體內(nèi)自身抗體產(chǎn)生增多有關(guān)，其淋巴細(xì)胞凋亡異常在其發(fā)病機(jī)制中起一定作用。

StudyonLymphocyteApoptosisinPatientswithsystemicLupusErythematosusShiChenggang,YinPeida,LiuYaguang,etal.DepartmentofRheumatology,FirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversityofMedicalSciences,Guangzhou510080

【Abstract】ObjectiveToassesstherateofapoptosisoflymphocytesisolatedfrompatientswithsystemiclupuserythematosus(SLE)andinvestigatethecorrelationbetweenlymphocyteapoptosis(LA)andautoantibodyproduction.MethodsLymphocyteswereisolatedbyFicoll-Hypaquegradient,culturedin12-wellplatesfor0,24,48hours,andexaminedbyacridineorange(AO)stainingunderfluorescencemicroscope.ResultsTheratesofLAof22SLEpatientsweresigificantlyincreasedatt24(P〈0.01)andt48(P〈0.01)comparedwiththoseof16normalcontrols.Themoreseverethediseaseactivity,thehighertherateofLA.Inthepatientswith≥2autoantibodieshigherlevelsofLAatt24(P〈0.05)andt48(P〈0.01)wereobserved.ConclusionTheresultsindicatethattheinvitroaccelerationofLAinSLE

patientsmayberelatedtotheincreasedproductionofautoantibodies,andtheabnormalitiesofLAmayplayaroleinthepathogenesisofSLE.

【Keywords】Lupuserythematosus,SystemicLymphocyteApoptosis

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種自身免疫性疾病，是由于多克隆的B細(xì)胞激活和T細(xì)胞功能異常，產(chǎn)生多種自身抗體，形成免疫復(fù)合物而致病。目前已證實(shí)：狼瘡模型MRL-lpr/lpr小鼠中，由于內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒早期轉(zhuǎn)座子(earlytransposon,ETn)插入Fas/Apo-1基因(細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)基因)，引起該基因突變，誘發(fā)細(xì)胞凋亡功能喪失，使自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆消除功能缺陷和抗原誘導(dǎo)的成熟的自身反應(yīng)性B細(xì)胞凋亡減少，導(dǎo)致淋巴樣增殖(lymphoproliferation,lpr)和系統(tǒng)性淋巴增殖病(generalizedlymphoproliferativedisease,gld)，大量自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞進(jìn)入外周淋巴組織，產(chǎn)生多種自身抗體，引發(fā)一系列病理改變，如狼瘡性腎炎、血管炎、淋巴結(jié)增大、皮膚損害等［１，２］。國(guó)外已有一些關(guān)于SLE患者細(xì)胞凋亡異常的研究報(bào)道［３，４］，但國(guó)內(nèi)報(bào)道較少。本文研究旨在了解SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡(LA)情況與自身抗體產(chǎn)生的關(guān)系，以及使用糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒藥物對(duì)LA的影響。

病例和方法

一、研究對(duì)象

1996年6～12月，本院風(fēng)濕內(nèi)科住院的22例SLE患者，均符合1982年ARA診斷標(biāo)準(zhǔn)，其活動(dòng)性指標(biāo)按SLEDAI［５］；其中女20例，男2例，年齡19～54歲，平均31歲。16例正常人對(duì)照組為同期廣州市血液中心健康獻(xiàn)血者，其中女14例，男2例；年齡19～50歲，平均31歲。

二、淋巴細(xì)胞分離和培養(yǎng)

取5ml靜脈肝素抗凝血，用淋巴細(xì)胞分離液獲得淋巴細(xì)胞，將其培養(yǎng)于12孔板、含有10%胎牛血清的1640RPMI培養(yǎng)基內(nèi)，置于37℃溫箱中。分別培養(yǎng)0、24、48小時(shí)，等量取樣作LA檢測(cè)。

三、LA檢測(cè)

吖啶橙(acridineorange,AO)染色，熒光顯微鏡檢測(cè)［３］，方法簡(jiǎn)述為：取25μl淋巴細(xì)胞，加入1μlAO液(100μg/ml)充分混勻，再加入20μl1%多聚甲醛固定細(xì)胞，24小時(shí)內(nèi)熒光顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。每份標(biāo)本2人雙盲觀察計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)200個(gè)以上細(xì)胞，其凋亡細(xì)胞確定標(biāo)準(zhǔn)為［３］：①核碎裂有凋亡小體(圖1)；②核濃縮，形成新月體狀(圖2)；③核有空泡(圖3)。

圖1三個(gè)細(xì)胞均為凋亡細(xì)胞，核碎裂，有凋亡小體(×40)

圖2右為凋亡細(xì)胞，核濃縮，形成新月?tīng)睿杂幸坏蛲鲂◇w；左為正常細(xì)胞(×40)

圖3右上角細(xì)胞核有空泡(黑影)，兩個(gè)小細(xì)胞為凋亡細(xì)胞，三個(gè)大細(xì)胞為正常細(xì)胞(×40)

四、臨床資料

在取血作LA檢測(cè)同時(shí)，用免疫印跡法檢測(cè)各種自身抗體(主要包括ANA、抗ds-DNA、抗-Sm、抗RNP、抗Rib、抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-1、抗Scl-70、RF)及收集有關(guān)資料。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果中所列數(shù)據(jù)以±s表示，均進(jìn)行方差分析，采用t檢驗(yàn)或t′檢驗(yàn)。

結(jié)果

一、SLE患者與正常人對(duì)照組LA率比較及疾病活動(dòng)性影響

經(jīng)培養(yǎng)24、48小時(shí)后，SLE患者LA較正常人對(duì)照組約有3倍左右增高；活動(dòng)期SLE，LA率較穩(wěn)定期明顯增高。使用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素或環(huán)磷酰胺組，其LA率在24小時(shí)時(shí)均較未用藥組有明顯增高，但48小時(shí)時(shí)無(wú)顯著性差異(見(jiàn)表1)。

二、自身抗體產(chǎn)生與LA間的關(guān)系

2種以上自身抗體陽(yáng)性者較1種陽(yáng)性者，其淋巴細(xì)胞隨著體外培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而凋亡顯著加速(見(jiàn)表2)。

表1SLE患者與正常人對(duì)照組不同培養(yǎng)時(shí)間

淋巴細(xì)胞凋亡率(%)比較(±s)

組別例數(shù)培養(yǎng)不同時(shí)間淋巴細(xì)胞凋亡率0小時(shí)24小時(shí)48小時(shí)正常人對(duì)照組161.22±0.888.66±3.3815.38±6.32SLE患者221.65±1.0926.70±10.83**44.84±13.66**穩(wěn)定期91.50±1.1220.61±8.4837.06±12.79活動(dòng)期131.65±1.0530.85±10.38*50.23±11.86*注：SLE患者與正常人對(duì)照組間及SLE患者穩(wěn)定期與活動(dòng)期間比較*P〈0.05，**P〈0.01

表22種以上自身抗體(Ab)陽(yáng)性與一種或無(wú)自身抗體陽(yáng)性的

SLE患者淋巴細(xì)胞凋亡率(%)比較(±s)

組別例數(shù)培養(yǎng)不同時(shí)間淋巴細(xì)胞凋亡率0小時(shí)24小時(shí)48小時(shí)≤1種Ab組102.05±1.1421.65±9.3136.45±11.99≥2種Ab組121.21±0.8430.92±10.50*52.50±11.54***P〈0.05，**P〈0.01

討論

本研究將SLE患者外周血淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)，其凋亡較正常健康者顯著增高增快，這是因?yàn)镾LE患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞本身可能有凋亡基因表達(dá)異常，或過(guò)多處于激活狀態(tài)，出現(xiàn)激活誘導(dǎo)性細(xì)胞凋亡(activation-inducedcelldeath)，因而在體外培養(yǎng)后則易進(jìn)入凋亡［３］。結(jié)果還顯示：SLE患者自身抗體產(chǎn)生越多者，其LA率就越高，這與目前關(guān)于SLE發(fā)病機(jī)理中的新假說(shuō)相吻合，即SLE的LA加速、暴露并釋放出較多的自身抗原，它們作為隱蔽抗原，激發(fā)自身免疫反應(yīng)，產(chǎn)生更多自身抗體，并與之結(jié)合形成免疫復(fù)合物而致病［６］。并且，隨著疾病活動(dòng)增加，LA更多，出現(xiàn)更多自身抗原及抗體，亦即疾病愈活動(dòng)，凋亡改變愈明顯［３］。

本研究只是檢測(cè)SLE患者總體LA情況，說(shuō)明SLE患者LA在體外加速，與體內(nèi)自身抗體產(chǎn)生增多可能有關(guān)，并在其發(fā)病機(jī)理中起一定作用。

參考文獻(xiàn)

1ChuJL,DrappaJ,ParnassaA,etal.ThedefectinFasmRNAexpressioninMRL/lprmiceisassociatedwithinsertionoftheretrotransposon,ETn.JExpMed,1993,178∶723-730.

2WuJG,ZhouT,HeJ,etal.Autoimmunediseaseinmiceduetointegrationofanendogenousretrovirusinanapoptosisgene.JExpMed,1993,178∶461-468.

3EmlenW,NieburJ,KaderaR.Accleratedinvitroapoptosisoflymphocytesfrompatientswithsystemiclupuserythematosus.JImmunol,1994,152∶3685-3692.

4MyslerE,BiniP,DrappaJ,etal.Theapoptosis-1/Fasproteininhumansystemiclupuserythematosus.JClinInvest,1994,93∶1029-1034.

5BombardierC,GladmanDD,UrowitzMB,etal.DerivationoftheSLEDAI:adiseaseactivityindexforlupuspatients.ArthritisRheum,1992,35∶630-640.

6MohanC,DattaSK.Lupus:keypathogenicmechanismsandcontributingfactors.ClinImmunolImmunopathol,1995,77∶209-220.

(收稿：1997-03-17修回：1997-09-30)

（責(zé)任編輯：zxwq）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者淋巴細(xì)胞凋亡的研究

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