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我國六城市性病高危人群生殖支原體感染狀況的分子流行病學研究

中華皮膚科雜志1999年第3期第32卷論著

作者：駱丹梁國鈞胡春梅黃澍杰謝瑞亭孫郎炎朱文元徐文嚴

單位：駱丹朱文元謝瑞亭210029南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院皮膚科；梁國鈞徐文嚴中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學皮膚病研究所；胡春梅廣東省東莞市慢性病防治院；黃澍杰廣東省江門市皮膚病防治所；孫郎炎常州市人民醫(yī)院皮膚科

關(guān)鍵詞：生殖支原體感染流行病學

【摘要】目的對我國部分地區(qū)不同類型的性病人群進行生殖支原體(Mg)感染狀況檢測分析，以明確Mg感染在非淋菌性尿道炎中的可能致病作用。方法采用兩對引物的聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，根據(jù)Mg粘附蛋白基因及支原體種屬內(nèi)核糖體基因序列設(shè)計引物，收集廣東、昆明、上海、南京、常州等地性病門診和(或)性罪錯者的泌尿生殖道分泌物標本。結(jié)果性病高危人群的MgDNA檢出率明顯高于正常體檢組(χ2=7.822,P＜0.01)，其中廣東性病門診及昆明性罪錯人群的MgDNA檢出率明顯高于南京、上海、常州等地兩種人群的檢出率(χ2="8.536,P%26lt;"0.01及χ2="5.885,P%26lt;"0.05)。未查到其他相關(guān)病原體者亦可查及MgDNA；有Mg感染者亦可同時感染其他微生物，如衣原體、解脲支原體等；有尿道炎癥狀病例中MgDNA的檢出率高于無尿道炎癥狀者(χ2="11.667,P%26lt;"0.01)。結(jié)論性病高危人群中存在生殖支原體的感染，在不同地區(qū)不同類型人群組中Mg感染率有一定差異。

MolecularEpidemiologicStudyofMycoplasmaGenitaliumInfectioninHighRiskPopulationsofSTDsfromSixCitiesinChina

LUODan,LIANGGuojun,HUChunmei,etal.

DepartmentofDermatology,FirstAffiliatedHospital,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210029

【Abstract】ObjectiveTodetectMycoplasmagenitalium(Mg)infectioninhighriskpopulationsofSTDsfromsixcitiesinChinaandtrytoclarifythepossibleroleofMginthepathogenesisofnongonococcalurethritis.MethodsPolymerasechainreaction(PCR)techniquebasedon2pairsofprimerforMgPa(adhesionprotein)and16SrRNA(Mycoplasmagenera)wasusedtodetectMginfection.UrogenitalspecimensofdifferenthighriskpopulationsorurethritispatientsofSTDswerecollectedfromGuangdong,Kunming,Shanghai,Nanjing,andChangzhouareas.ResultsThepositivedetectionrateofMgDNAinhighriskpopulationsofSTDswassignificantlyhigherthanthatofnormalgroup(χ2=7.822,P＜0.01).ThepositivedetectionratesinSTDclinicsfromGuangdongandpromiscuouspersonsfromKunmingwerehigherthanthosedetectedfromShanghai,NanjingandChangzhouareas(χ2="8.536,"P＜0.01andχ2="5.885,P%26lt;"0.05).MgDNAcouldbedetectedinthosepatientswithoutotherrelevantpathogens.SomepatientssimultaneouslyinfectedbothMgandothermicrobes,suchasChlamydiatrachomatisand/orUreaplasmaurealyticum.ThepositiveMgDNAdetectionrateinpatientswithurethritissymptomswashigherthanthatwithoutthesymptoms(χ2="11.667,"P＜0.01).ConclusionMginfectionexistsinhighriskpopulationsofSTDsinChina,andMginfectionrateisdifferentamongdifferenthighriskgroups.

【Keywords】MycoplasmagenitaliumInfectionEpidemiology

Tully于1981年首次從2例非淋菌性尿道炎(NGU)患者泌尿生殖道分泌物中分離出2株生殖支原體(Mg)，后經(jīng)有關(guān)學者發(fā)現(xiàn)此支原體是與人類尿道炎、宮頸炎、盆腔炎感染相關(guān)的一種新型支原體[1，2]。Mg的培養(yǎng)非常困難，直至建立分子生物學技術(shù)后才使有關(guān)疾病的診治以及流行病學研究成為可能。本研究在獲得Mg分離培養(yǎng)成功以及采用多對引物擴增Mg－DNA的基礎(chǔ)上，開始對國內(nèi)部分地區(qū)不同類型的性病高危人群進行Mg感染狀況的檢測分析，以期探討Mg的可能致病作用以及與其他微生物的感染有無相互關(guān)系[3，4]?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

材料與方法

(一)標本來源：性病門診患者511例，其中男274例，女237例，年齡13～58歲，平均年齡29.4歲。性罪錯者共235例，其中男130例，女105例，年齡15～55歲，平均23.5歲。性伴數(shù)1～7人不等。標本分別來自廣東、上海、南京、昆明、常州。其中淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體均陰性的標本數(shù)共182份。南京及江門兩地有癥狀NGU標本116份，無癥狀的NGU標本64份。正常體檢對照56例，男30例，女26例，年齡17～35歲。

(二)方法：取材方法及PCR方法見文獻[4]。

(三)統(tǒng)計學方法：采用χ2檢驗進行統(tǒng)計學處理。

結(jié)果

1.性病高危人群中MgDNA的檢測：表1顯示性病門診患者與性罪錯者間Mg感染率經(jīng)卡方檢驗差異無顯著性(χ2=0.49,P＞0.05)，但與正常人群比較，STD高危人群Mg感染率明顯升高，差異具有高度顯著性(χ2=7.822,P＜0.01)。對廣東、南京、常州等地性病門診標本的MgDNA進行檢測發(fā)現(xiàn)，廣東地區(qū)陽性檢出率達20.69％(54/261)，與其它地區(qū)相比，差異具有高度顯著性(χ2="8.536,P%26lt;"0.01)；南京、上海、常州地區(qū)的陽性檢出率間差異無顯著性，分別為11.46％(11/96)、10.71％(9/84)及11.43％(8/70)。對昆明、上海兩地性罪錯者的泌尿生殖道分泌物進行檢測發(fā)現(xiàn)，昆明地區(qū)MgDNA檢出陽性率為19.2％(24/125)，明顯高于上海地區(qū)的陽性檢出率8.18％(9/110)，其差異具有高度顯著性(χ2="5.88,P%26lt;"P＞0.05)。

2.不同性別的高危人群MgDNA檢測：表2顯示兩種性別間MgDNA的檢測結(jié)果，性病門診標本及性罪錯組的MgDNA陽性檢出率在兩性別間差異無顯著性(χ2=0.06,P＞0.05)。經(jīng)卡方檢驗表明這組高危人群兩性別間MgDNA檢出率差異亦無顯著性(χ2=0.12,P＞0.05)。

3.淋球菌(NG)、衣原體(Ct)、解脲支原體(Uu)陰性時的MgDNA檢測：182份來自南京、常州、東莞、江門性病門診標本，其他病原體如Ct、NG及Uu均為陰性，此時檢出MgDNA32例，陽性檢出率為17.58％，經(jīng)卡方檢驗，長江以南某些地區(qū)與廣東某些地區(qū)的Mg感染率無差異(χ2=1.98,P＞0.05)(表3)。對東莞地區(qū)性病門診中合并或未合并NG、Ct、Uu感染者檢出后發(fā)現(xiàn)，NG、Ct或Uu陰性的幾組標本中，MgDNA檢出率雖然分別高于NG、Ct或Uu陽性者，但經(jīng)統(tǒng)計學處理差異亦無顯著性。

4.有無尿道炎癥狀對MgDNA檢出率的影響：表4顯示南京、江門地區(qū)性病門診中有尿道炎表現(xiàn)與無尿道炎表現(xiàn)患者分泌物標本的MgDNA檢出率，結(jié)果顯示有癥狀者Mg檢出率明顯高于無癥狀者(南京χ2=5.17,江門χ2=5.31,P均＜0.05)。將116例有＜TABLEBORDER＞檢測對象受檢例數(shù)陽性數(shù)陽性率(％)STD門診患者5118216.05性罪錯者2353314.04正常人對照組5611.79合計80211614.46

表1性病高危人群與正常人對照組生殖支原體感染率的比較

檢測對象受檢例數(shù)據(jù)陽性數(shù)陽性率（％）STD門診患者5118216.05性罪錯者2353314.04正常人對照組5611.79合計80211614.46表2不同性別高危人群生殖支原體DNA的檢測

檢測對象檢查例數(shù)陽性數(shù)陽性率(％)STD門診患者男2744516.42女2373715.61性罪錯者男1301914.62女1051413.33合計男4046415.84女3425114.91表3淋球菌、衣原體、解脲支原體均陰性的性病門診標本生殖支原體DNA檢測

地區(qū)標本數(shù)陽性數(shù)陽性率(％)南京44613.64常州32412.50東莞621219.35江門441022.73合計1823217.58表4性病門診有無尿道炎癥狀的患者生殖支原體DNA檢測比較

地區(qū)分組例數(shù)陽性數(shù)陽性率(％)χ2P南京有癥狀無癥狀503410120.02.975.17＜0.05江門有癥狀無癥狀663318227.276.675.31＜0.05癥狀與67例無癥狀的Mg檢測結(jié)果合計進行統(tǒng)計比較證明，差異具有高度顯著性(χ2=11.68,P＜0.01)。

討論

Mg的分離培養(yǎng)非常困難，故自1981年Tully首次從2例男性NGU中分離出2株Mg后，至今很少報道，直至建立核酸探針及PCR技術(shù)后，才使有關(guān)Mg的流行病學研究、致病性研究及臨床治療等研究得以進一步發(fā)展[5，6]。我們雖有分離培養(yǎng)成功的報告，但深切體會到該種支原體在復蘇傳代過程中極易丟失或死亡，且培養(yǎng)時間需30～120d左右，因此單以培養(yǎng)法作為Mg感染診斷的唯一指標很難滿足臨床明確病因診斷及隨訪治療的需要，因而不能有效控制Mg的感染及傳播。

本文檢測了511份STD門診標本，陽性率達16.05％，性罪錯人群235例，陽性率為14.04％，均在國內(nèi)外報道范圍(5％～27％)之內(nèi)。根據(jù)趙季文等[3]培養(yǎng)結(jié)果，高危人群的總分離率僅為3.52％，而PCR檢測結(jié)果顯示感染率可高達15.42％，提示僅用培養(yǎng)法作為篩檢Mg感染的實驗診斷手段，可能將低估了Mg在國內(nèi)的流行率。為此本研究亦初步探索PCR技術(shù)在MgDNA檢測及診斷中的應(yīng)用價值。MgPa(粘附蛋白)為Mg的結(jié)構(gòu)及功能蛋白，與該支原體粘附宿主生殖上皮細胞有關(guān)，甚至可能與其致病性有關(guān)；根據(jù)MgPa基因序列設(shè)計的引物可在Mg標準株及臨床標本中擴增出相應(yīng)的DNA片段，在Mg種支原體中相對特異而穩(wěn)定。Jensen提供的16SrRNA引物為原核生物中高度保守的基因序列，因此在支原體屬中亦相對穩(wěn)定，兩者的特異性試驗表明引物特異性較高，從而保證了臨床應(yīng)用中的可靠性及準確性[4]。就Mg感染的地區(qū)分布而言，廣東及昆明兩地仍較其他地區(qū)明顯增高，分別為20.69％及19.20％，這可能與我國整個性病的地區(qū)分布有關(guān)，如按1995年報道，以中南地區(qū)為最高，廣東省的發(fā)病率為128.19/10萬，而河北省發(fā)病率僅為2.34/10萬[7]，此結(jié)果提示在性病高發(fā)地區(qū)可能亦有Mg支原體的流行。將東莞地區(qū)性病門診NG、Ct、Uu分別為陽性及陰性的MgDNA檢測結(jié)果對比起來，可以看出雖然MgDNA的檢測率在NG－、Ct－及Uu－3組中較NG＋、Ct＋及Uu＋者為高，但經(jīng)χ2檢驗分析，此差異無統(tǒng)計學意義，此結(jié)果可能與檢測樣本數(shù)量較小有關(guān)，也可能表明Mg的感染及檢出并不受其他病原微生物存在與否的影響，此與Horner及Jensen的報道與觀點相符[8，9]。再結(jié)合表3的結(jié)果還可說明，高危人群不僅可同時感染Mg和其他微生物，并且Mg還可單獨存在于STD高危人群的泌尿生殖道內(nèi)。表4的結(jié)果進一步說明Mg可能與尿道炎有關(guān)，因為南京及江門兩地有癥狀患者標本的Mg檢出率均明顯高于無癥狀者。此兩地的標本多來自于輾轉(zhuǎn)求醫(yī)、反復治療過的性病門診就診者，說明Mg可能引起慢性、持續(xù)性或復發(fā)性NGU的臨床表現(xiàn)。

本研究結(jié)果反映了以下幾點：①Mg在我國高危人群的檢出率比正常體檢組為高；②NG、Ct、Uu陽性與陰性者的標本均可檢出Mg，說明Mg存在可能與其他微生物存在與否無關(guān)，而且也可能是很多淋病后尿道炎的病因之一；③Mg在NG、Ct、Uu均陰性者有一定的檢出率以及Mg在有癥狀的尿道炎標本內(nèi)檢出率較高，亦可說明Mg不僅在NGU，而且在非特異性尿道炎中可能具有一定的相關(guān)作用。

參考文獻

1TullyJG,TylorRoinsonD,LolRM.AnewlydiscoveredMycoplasmainthehumanurogenitaltract.Lancet,1981,12881291．

2TaylorRobinsonD,GilroyCB,HayPE.OccurrenceofM.genitaliumindifferentpopulationanditsclinicalsignificance.ClinInfectDis,1993,17(Suppl1):66－68.

3趙季文，駱丹，王婉云，等.高危人群生殖支原體分離培養(yǎng)的初步報告.中華皮膚科雜志，1998，31：147－149.

4駱丹，胡春梅，梁國鈞，等.聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測支原體感染.臨床皮膚科雜志，1998，27：216－218.

5HootonTM,RobertsMC,RobertsPL.PrevelenceofM.genitaliumdeterminedbyDNAprobeinmenwithurethritis.Lancet,1998,1:266－268.

6JensenJS,UldamSA,SondergardandersenJ.PolymerasechainreactionfordetectionofMycoplasmagenitaliuminclinicalsamples.JClinMicrobiol,1991,29:46－50.

7徐文嚴.中國性病的流行情況與防治對策.性傳播疾病診療與預防.見：1996年全國性病學術(shù)研討會論文集.廣州：廣東科學技術(shù)出版社,1996.2－8.

8HornerPG,GilroyCB,ThomasBJ.AssociationofMycoplasmagenitaliumwithacutenongonococcalurethritis.Lancet,1993,342:582－585.

9JensenJS,QrsumR,DohnB.Mycoplasmagenitalium:acauseofmaleurethritis?GenitourinMed,1993,69:265－269.

(收稿：1998－12－01修回：1999－02－25)

（責任編輯：zxwq）

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