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新疆Kaposi肉瘤組織內(nèi)人類8型皰疹病毒DNA的PCR檢測

發(fā)布時間： 2016-07-11 18:15:10      來源：健康族
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新疆Kaposi肉瘤組織內(nèi)人類8型皰疹病毒DNA的PCR檢測中華皮膚科雜志1998年第6期第31卷論著摘要作者：普雄明石得仁沈大為單位：830001烏魯木齊新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院

新疆Kaposi肉瘤組織內(nèi)人類8型皰疹病毒DNA的PCR檢測

中華皮膚科雜志1998年第6期第31卷論著摘要

作者：普雄明石得仁沈大為

單位：830001烏魯木齊新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院皮膚科(普雄明石得仁)；新疆醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院皮膚科(沈大為)

近年來人們在Kaposi肉瘤(KS)組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)一種新的皰疹病毒——人類8型皰疹病毒(HHV-8)，但國內(nèi)目前尚未見到有關KSHHV-8的研究報道，因此我們對新疆KS組織進行了HHV-8DNA的PCR檢測，特報道如下。

一、材料和方法

材料：PCR擴增組織標本均為新疆維吾爾自治區(qū)醫(yī)院皮膚科病理室存檔蠟塊，其中KS組織20塊，銀屑病組織16塊，扁平苔蘚組織10塊，濕疹皮炎組織10塊，尖銳濕疣組織10塊，皮膚纖維瘤組織10塊，正常皮膚組織10塊。標本蠟塊總量(含正常皮膚及幾種非KS病理組織對照)共86塊。每塊組織切6μm厚薄片3～5張，放入離心管內(nèi)，二甲苯脫蠟10分鐘，無水乙醇洗脫2次，每次5分鐘，雙蒸水洗脫3次后備用。PCR引物的設計與合成參照Moore等[1]報道的引物序列，(5′TCCGTGTTGTCTACGTCCAG3′和5′AGCCGAAAGGATTCCACCAT3′)，由美國Cybersyn公司合成，PCR產(chǎn)物片段為233bp。

方法：1組織內(nèi)DNA提取采用蛋白酶K消化法，消化液內(nèi)蛋白酶K終濃度為300μg/ml，每例組織內(nèi)加消化液100μl，37℃過夜后，95℃加熱10分鐘，滅活離心后取10μl上清液用于PCR擴增。2PCR擴增大致按Moore等[1]介紹的方法進行，取10μl處理后的模板上清液加入40μlPCR反應液中，40μl反應終體積含10mmol/LTris-HCl緩沖液(pH9.0)，1.5mmol/LMgCl2，50mmol/LKCl，2UTaqDNA聚合酶，dNTPs各20μmol/L，加引物Ⅰ(上游引物)和引物Ⅱ(下游引物)各2μmol/L。加入30μl石蠟油封閉后進行PCR循環(huán)，應用PE-480型DNA擴增儀，94℃預變性300秒后，94℃60秒，58℃60秒，72℃90秒，共35個循環(huán)后72℃300秒延伸。取擴增產(chǎn)物15μl，在含0.5μg/ml溴乙錠的2.5％瓊脂糖凝膠中電泳半小時(80V/cm)，根據(jù)擴增電泳帶的長度，在紫外燈下參照核酸小分子量標準對照(上海復華實業(yè)生物醫(yī)學工程公司生產(chǎn))，最終產(chǎn)物為233bp，確定為陽性診斷。

二、結果

20例KS病理組織中14例HHV-8DNA陽性(70％)，10例正常皮膚組織均為陰性，銀屑病16例中1例、扁平苔蘚10例中1例、纖維瘤10例中2例陽性。

三、討論

1994年Chang等[1]首先從AIDS相關型KS患者皮損中發(fā)現(xiàn)了一種新的皰疹病毒DNA序列，即HHV-8。1995年，Moore等[2]根據(jù)Chang等的報道進一步對幾種類型KS進行了HHV-8的PCR研究，結果均檢出HHV-8DNA，且陽性率極高，作者同時對這些陽性的PCR產(chǎn)物(KS330233)進行了DNA測序，結果顯示三種類型KS的基因組序列均相同，而對照組幾乎均為陰性，說明KS330233不是人類基因組部分，而是與外源性基因的插入有關，因此認為HHV-8對KS可能不僅是機會感染，而是KS的可能病因。但也有作者對HHV-8是否就是KS的病原持不同意見，如Rady等[3]曾報道在免疫抑制患者發(fā)生的各種不同皮膚腫瘤中檢出233bp的產(chǎn)物，因此推測HHV-8可能是一種存在于免疫抑制患者增生性損害內(nèi)的一種廣泛播散的潛伏病毒。我們引用Moore等[2]報道的引物序列，對20例新疆KS患者瘤組織進行了PCR檢測，結果14例KS患者瘤組織中檢測到HHV-8DNA，而正常皮膚和幾種非KS皮膚病理組織中僅檢出4例(6.1％)，說明新疆KS病理組織中存在著較高的HHV-8感染率，但并不是所有組織都能檢出，新疆KS的檢出率低于Moore等[2]的報道，同時在非KS病理組織中，特別是10例皮膚纖維瘤組織有2例陽性，而這2例患者并未用過任何免疫抑制劑，這一結果很難說明HHV-8感染是新疆KS發(fā)生的唯一病因或HHV-8感染僅發(fā)生于KS。目前有關HHV-8和KS發(fā)病關系的研究主要集中在是否HHV-8和其它皰疹病毒一樣在健康人組織內(nèi)就可能存在及感染HHV-8后都可以發(fā)生KS。如1996年有作者應用PCR方法在健康成人的前列腺組織和精液內(nèi)查到HHV-8DNA，并推測前列腺組織可能是HHV-8感染后的存留部位[4]，它提示感染HHV-8后并不一定都發(fā)生KS。綜上我們認為新疆KS的發(fā)生無疑與HHV-8有關，但HHV-8不是唯一的病因，我們支持既往的觀點，新疆KS的發(fā)生可能是遺傳因素、種族因素、免疫受損和病毒感染等多種因素共同綜合作用的結果[5]。

參考文獻

1ChangY,CesarmanE,PressinMS,etal.Identificationofherpesvirus-likeDNAsequencesinAIDS-associatedKaposi′ssarcoma.Science,1994,266∶1865-1869.

2MoorePS,ChangY.Detectionofherpesvirus-likeDNAsequencesinKaposi′ssarcomainpatientswithandthosewithoutHIVinfection.NEnglJMed,1995,332∶1181-1185.

3RadyPL,YenA,RollefsonJL,etal.Herpesvirus-likeDNAsequencesinnon-Kaposi′ssarcomaskinlesionoffransplantpatient.Lancet,1995,345∶1043-1044.

4MoniniP,LellisLD,FabrisM,etal.Kaposi′ssarcoma-associatedherpesvirusDNAsequencesinprostatetissueandhumansemen.NEnglJMed,1996,334∶1168-1172.

5普雄明,石得仁,沈大為.新疆Kaposi肉瘤組織內(nèi)巨細胞病毒抗原的檢測報告.臨床皮膚科雜志,1994,23∶74-75.

(收稿：1997-11-11修回：1998-04-28)

（責任編輯：zxwq）

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