克霉唑陪他米松乳膏中主藥及雜質(zhì)二苯基

　　克霉唑陪他米松乳膏是由克霉唑和二丙酸陪他米松制成的復(fù)方制劑，主要用于紅色毛癬菌、絮狀表皮菌等。我們采用hplc法測定了該制劑中主藥的含量和有關(guān)物質(zhì)，方法準(zhǔn)確、簡便、快速。

　　1儀器與試藥 agilent1100型高效液相色譜儀;色譜柱為waters c18柱(150mm×4.6mm,5μm )克霉唑?qū)φ掌?批號：10037-0105，中國藥品生物制品檢定所)、二丙酸倍他米松對照品(批號：bet-20080501)、二苯基-(2-氯苯基)甲醇對照品(批號：100019-200603，含量100.0%，中國藥品生物制品檢定所);克霉唑倍他米松乳膏(上海3葆雅制藥有限公司，批號：07hnbna001)。

　　甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。 2有效成分含量測定方法與結(jié)果 2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)采用c18柱，甲醇-0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液(7:3)用稀磷酸調(diào)節(jié)ph至5.75為流動(dòng)相;檢測波長240nm。理論板數(shù)按克霉唑峰計(jì)應(yīng)不低于4000，克霉唑峰、二丙酸陪他米松峰、二苯基-(2-氯苯基)甲醇峰和其他雜志峰的分離度應(yīng)符合要求。

　　2.2測定方法取本品適量(相當(dāng)于克霉唑10mg)，置50ml量瓶中，加甲醇-水(7:3)適量，置50°c水浴中加熱，時(shí)時(shí)振搖使溶解，取出強(qiáng)烈振搖5min，搖勻，放冷至室溫，用甲醇-水(7:3)稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，精密量取上述供試品溶液50μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取克霉唑、二丙酸陪他米松對照品適量，加甲醇-水(7:3)溶解并定量制成每1ml約含克霉唑0.2mg、二丙酸陪他米松10μg的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

　　2.3 波長的選擇本品為復(fù)方制劑，主要成份為二丙酸陪他米松和克霉唑，二者的處方量相差較大，因此在波長選擇時(shí)應(yīng)兼顧二者的吸收值。二丙酸陪他米松在240nm處有最大吸收;克霉唑在260nm和220nm的波長有最大吸收，在240nm出雖不是最大吸收但吸收值較大，綜合考慮兩者的紫外吸收情況和樣品中兩成分比例，選用240nm作為含量測定的波長。二苯基-(2-氯苯基)甲醇在215nm附近有最大吸收，克霉唑在215nm波長處的響應(yīng)值也較高，綜合兩者的情況選用215nm作為雜質(zhì)含量測定的波長。

　　2.4 系統(tǒng)耐用性分別用waters公司、aichron bond-aq、agilent eclips的c18色譜柱和agilent1100、waters2695高效液相色譜儀按上述條件試驗(yàn)，結(jié)果不同公司的高效液相色譜儀和色譜柱對檢測影響不大，檢驗(yàn)結(jié)果基本一致，本方法的耐用性較好。

　　2.5 峰純度檢查取“1.3.3”項(xiàng)下經(jīng)破壞處理的供試品溶液，用二極管陣列檢測器在210nm至400nm的范圍內(nèi)掃描，克霉唑峰、二丙酸陪他米松峰壑二苯基-(2-氯苯基)甲醇峰的峰純度均在990以上，說明該方法可用于測定克霉唑、二丙酸陪他米松和二苯基-(2-氯苯基)甲醇。

　　2.6 線性關(guān)系取克霉唑?qū)φ掌?.1042g，置于100ml量瓶中，用甲醇-水溶液(7:3)溶解并稀釋至刻度，作為克霉唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液。分別取對照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇-水溶液制成每毫升含20.84、62.52、104.2、208.4、312.6、521μg的二丙酸陪他米松溶液，按“1.2.2”項(xiàng)下方法測定，記錄色譜圖，以峰面積對濃度進(jìn)行線性回歸，克霉唑回歸方程y=7.7542x+68.959(r=0.9997)，二丙酸陪他米松回歸方程y=59.28x+0.8695(r=0.9999)，說明克霉唑在20.84~521.00μg/ml范圍內(nèi)，二丙酸陪他米松在1.29~32.30μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

　　2.7 精密度與重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取試品適量，按“1.2.2”項(xiàng)下平行制備6份，分別進(jìn)樣50μl，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測得克霉唑平均含量94.39%、rsd=1.10%(n=6);二丙酸陪他米松平均含量96.06%，rsd=0.75%(n=6)。取上述溶液一份，連續(xù)進(jìn)樣5次?？嗣惯蚍迕娣e的rsd為0.16%，二丙酸陪他米松面積的rsd為0.055%。

　　2.8 加樣回收試驗(yàn)取克霉唑和二丙酸陪他米松對照品適量，用甲醇-水(7:3)制成一定濃度的對照品濃溶液;精密量取對照品濃溶液和供試品適量，按“1.2.2”項(xiàng)下制備成濃度為80%、100%、120%的供試品溶液各三份，按“1.2.2”項(xiàng)下的方法試驗(yàn)，克霉唑平均加樣回收率為100.34%，rsd為0.77%(n=9);二丙酸陪他米松平均加樣回收率為100.34%，rsd為0.95%(n=9)。

　　2.9 穩(wěn)定性考察按“1.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液，于室溫下0、2、3、4、7h分別進(jìn)樣。結(jié)果克霉唑峰面積的rsd=0.74%，二丙酸陪他米松峰面積的rsd=0.02%，說明供試品溶液在7h內(nèi)基本穩(wěn)定。

　　2.10 檢測限于定量限分別取克霉唑和二丙酸陪他米松對照品溶液進(jìn)行稀釋，按上述確定的色譜條件進(jìn)樣，測得克霉唑檢測限位5.32ng(s/n=3)定量限為17.74ng(s/n=10);二丙酸陪他米松檢測限為0.75ng(s/n=3)，定量限為2.49ng(s/n=10)。

　　2.11 含量測定取供試品、克霉唑?qū)φ掌芳岸崤闼姿蓪φ掌愤m量，照“1.2.2”項(xiàng)方法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，供試品的克霉唑含量為95.26%，二丙酸陪他米松含量為96.33%。

　　3 雜質(zhì)二苯基-(2-氯苯基)甲醇的含量測定 3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)除檢測波長為215ml，進(jìn)樣量為10μl外，其他條件同“1.2.1”項(xiàng)。

　　3.2 測定方法取本品適量(相當(dāng)于克霉唑10mg)，置50ml量瓶中，加甲醇28ml，置50°c水浴中加熱，時(shí)時(shí)振搖使溶解，取出強(qiáng)烈振搖5min，加水12ml，搖勻，放冷至室溫，用甲醇-水(7：3)稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;精密量取上述供試品溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至供試品溶液主成分峰保留時(shí)間的1.5倍;另取二苯基-(2-氯苯基)甲醇對照品適量，加甲醇-水(7:3)溶解并定量，制成每毫升約含4μg的溶液，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

　　3.3 破壞試驗(yàn)取樣1g三份，分別加0.1mol/l鹽酸溶液5ml，0.1mol/l氫氧化鈉溶液5ml，過氧化氫溶液5ml，煮沸，室溫放置0.5h，調(diào)節(jié)ph至中性，用甲醇-水(7:3)轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，濾過，取續(xù)濾液作為酸破壞溶液、堿破壞溶液和氧化破壞溶液。取樣1g兩份，分別置50ml量瓶中，加甲醇-水(7:3)適量，分別置水浴中加熱1h和1000lx光照過夜，再用甲醇-水光照破壞溶液。按“1.3.1”項(xiàng)下方法測定。該法能有效檢測出各破壞性試驗(yàn)產(chǎn)生的降解物，且降解產(chǎn)物峰均能與主峰達(dá)到基線分離，專屬性較好。

　　3.4 加樣回收試驗(yàn)精密稱取二苯基-(2-二苯基)甲醇對照品適量，用甲醇-水(7:3)制成一定濃度的對照品濃溶液;精密取對照品濃溶液和供試品適量，按“1.3.2”項(xiàng)下制備成濃度為80%、100%、120%的供試品溶液，按“1.3.1”項(xiàng)下的方法試驗(yàn)，二苯基-(2-氯苯基)甲醇平均加樣回收率為99.83%，rsd為1.26%(n=9)。

　　3.5 二苯基-(2-氯苯基)甲醇線性范圍及檢測限取二苯基-(2-氯苯基)甲醇對照品0.01019g，置100ml量瓶中，用甲醇-水溶液(7:3)溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲(chǔ)備液。分別取對照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇-水溶液制成每1ml含10.19、5.095、2.548、2.038、1.274、1.019、0.8152、0.5095、0.2548μg的溶液，按“1.3.1”項(xiàng)方法測定，記錄色譜圖。以峰面積對二苯基-(2-氯苯基)甲醇濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：y=68.91x+0.386，r=0.9999(n=9)，結(jié)果表明，二苯基-(2-氯苯基)甲醇在5.096×10-3~0.2038μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。檢測限為0.6ng(s/n=3)。

　　3.6 穩(wěn)定性考察按“1.3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，于室溫下0、1、2、4、8h分別進(jìn)樣10μl結(jié)果二苯基-(2-氯苯基)甲醇峰的峰面積rsd=1.36%，供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定，但仍需盡快測定。

　　3.7 有關(guān)物質(zhì)測定按“1.3.2”項(xiàng)下的方法，對供試品中雜質(zhì)二苯基-(2-氯苯基)甲醇進(jìn)行測定，結(jié)果含量為0.89%。

　　4 討論《新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第37冊也采用hplc法測定克霉唑陪他米松乳膏的含量和有關(guān)物質(zhì)[1]，但該方法為內(nèi)標(biāo)法，操作繁瑣、取樣量大、不易濾過等。本文建立的方法克服了上述不足，方法簡便、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠，可作為質(zhì)量控制的分析方法。

　　在流動(dòng)相考察過程中發(fā)現(xiàn)，出峰的快慢及分離度受流動(dòng)相的ph值影響較大。ph值越小，出峰越快，但不利于主峰與氧化雜質(zhì)的分離;ph值越大，出峰越慢，但不利于主峰與二苯基-(2-氯苯基)甲醇雜質(zhì)峰的分離。試驗(yàn)表明：ph值在5.7~5.8最為適宜，故本方法采用ph值5.75。

　　實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)陪他米松和二丙酸陪他米松在該系統(tǒng)適用性條件下的保留時(shí)間不一致，而制劑處方中為二丙酸陪他米松而非陪他米松，所以測定含量時(shí)不能用陪他米松對照品替代二丙酸陪他米松對照品。 克霉唑在堿性介質(zhì)中相對穩(wěn)定，但在酸水介質(zhì)中易降解成二苯基-(2-氯苯基)甲醇和咪唑[8]。克霉唑原料及制劑在合成、生產(chǎn)、貯存及運(yùn)輸?shù)冗^程中都有可能造成藥物的降解。

　　本文建立的方法方便、快捷、準(zhǔn)確，可有效測定克霉唑陪他米松乳膏中雜質(zhì)二苯基-(2-氯苯基)甲醇的含量，從而有效控制藥物的質(zhì)量。

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