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淋球菌L型的誘導及基本生物學性狀的研究

發(fā)布時間： 2016-07-11 18:14:51      來源：健康族
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淋球菌L型的誘導及基本生物學性狀的研究中華皮膚科雜志1998年第5期第31卷論著摘要作者：唐寧楓宋寧靜林特夫黃谷良吳紹熙單位：210042中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學皮膚病研究

淋球菌L型的誘導及基本生物學性狀的研究

中華皮膚科雜志1998年第5期第31卷論著摘要

作者：唐寧楓宋寧靜林特夫黃谷良吳紹熙

單位：210042中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學皮膚病研究所(唐寧楓吳紹熙)；安徽蚌埠市第三人民醫(yī)院(宋寧靜)；蚌埠醫(yī)學院微生物教研室(林特夫黃谷良)

淋病奈瑟菌(簡稱淋球菌，NG)體內外可發(fā)生L型變異［1，2］。我們用抗生素誘導獲得淋球菌L型，并對其生物學性狀與原菌進行了比較，旨在了解淋球菌L型有何特性以便為臨床提供治療依據。為了實驗的需要，我們也對其保存進行了研究。

一、材料與方法

1.菌株：淋球菌標準菌株29400，購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所。NG1和NG2株為臨床分離并經系統(tǒng)鑒定。

2.淋球菌L型培養(yǎng)基：以牛肉浸液為基礎，加1%蛋白胨，1%NaCl，7%PVP，1%瓊脂，10%小牛血清。調整pH至7.2～7.5。

3.誘導劑的濃度范圍：不同濃度的苯唑青霉素加入淋球菌L型培養(yǎng)基中。其最終濃度依次為1200、1000、800、600、400、200、100、50、10、5、1μg/ml。將標準株、NG1株和NG2株分別接種于上述L型平板上，培養(yǎng)48小時，觀察L型菌落形成的情況。

4.傳代與回復試驗：誘導成的L型于L型平板上傳代時，在平板上貼苯唑青霉素紙片(500μg/片)，以獲穩(wěn)定的L型。取傳不同代數的L型移種于不含抗生素的L型平板上，觀察回復情況。

5.氧化酶試驗：取不同傳代數的L型菌落，滴加氧化酶試劑觀察菌落顏色變化情況。

6.糖發(fā)酵試驗：采用淋球菌L型糖發(fā)酵管，1%蛋白胨，1%糖，7%PVP，10%小牛血清，青霉素50U/ml。以溴甲酚紫為指示劑。取不同傳代數的三株淋球菌L型接種于三種糖發(fā)酵管中，培養(yǎng)24、48、72小時觀察顏色變化。

7.濾過性：將標準株的細菌型和L型制成菌懸液，比濁法測定濃度為5×109/ml，使細菌型和L型菌液分別經孔徑為0.45μm的除菌膜濾過。濾液涂布于L型平板上，培養(yǎng)48小時觀察生長情況。

8.藥敏試驗：分別將標準株的細菌型、穩(wěn)定L型和于含抗生素平板上傳5代后的回復株在L型及普通平板上按常規(guī)紙片法做藥敏試驗。

9.淋球菌L型的保存：采用保存淋球菌細菌型的方法［3］。將培養(yǎng)24小時標準株NG1和NG2的穩(wěn)定L型分別從L型平板上刮下，加入已脫脂的牛奶，調整濃度至3×109/ml，置于-25℃冰箱中。經5、10、15、20、25、30天后取牛奶管解凍，取0.05ml含細菌的牛奶均勻涂于淋球菌L型平板上，培養(yǎng)24小時。計算每個平板上的細菌數。

二、結果

1.苯唑青霉素誘導L型的濃度范圍：苯唑青霉素可誘導29400，NG1與NG2三株淋球菌形成L型的濃度范圍分別為5～800μg/ml、10～800μg/ml、50～1000μg/ml。在上述濃度范圍內細菌出現(xiàn)明顯的多形性，菌落中有絲狀體、巨形體及圓球體。

2.L型的傳代及回復：淋球菌L型在含有苯唑青霉素L型平板上可連續(xù)傳代，形成油煎蛋樣菌落，L型在含有苯唑青霉素的L型平板上傳10代以內容易回復，在不含苯唑青霉素平板上傳1～5代即可回復為原菌，在含苯唑青霉素平板上傳15代后L型基本穩(wěn)定。

3.氧化酶試驗：籍滴加氧化試劑后，L型菌落顏色有無改變及深淺判斷。隨傳代次數的增加，L型氧化酶反應逐漸減弱，10代以后為陰性反應。

4.糖發(fā)酵試驗：L型隨著傳代次數的增加，其分解葡萄糖的能力逐漸減弱，但傳至20代時仍呈弱陽性，與原菌一樣，L型各代均不分解麥芽糖和蔗糖。

5.濾過性：取L型通過0.45μm濾膜的濾液涂布于平板上，培養(yǎng)后見菌落生長，經涂片可見L型。細菌型的濾液涂布于平板上培養(yǎng)后無菌生長。

6.藥敏試驗結果見表1。

表1淋球菌細菌型、L型及回復株藥敏試驗

抗生素細菌型L型回復株青霉素G-+氨芐青霉素+-+羧芐青霉素+-+先鋒霉素Ⅴ-紅霉素--四環(huán)素-+-壯觀霉素++氟哌酸氟嗪酸++頭孢三嗪注：為高度敏感，+為中度敏感，-為耐藥

7.淋球菌L型的保存結果見表2。

表2淋球菌L型保存時間與復蘇菌落數的關系

菌株保存時間(天)5101520253029400L型＞104＞500247667-NG1L型＞104＞500178412-NG2L型＞104＞50014435--注：-表示無菌生長

三、討論

淋球菌L型的產生與誘導劑的濃度有關，濃度為5～800μg/ml的苯唑青霉素均可誘導三株淋球菌形成L型。NG2在濃度為1000μg/ml時仍可變?yōu)長型。盡管在治療的過程中青霉素使用的劑量較大，但其能在很大的濃度范圍內誘導淋球菌L型的形成，這給淋病的治療帶來困難。

淋球菌L型細胞壁不同程度的缺失而呈高度的多形性，細菌易變形，可通過除菌濾膜，是造成臨床上淋病漏診、誤診的重要原因。人工誘導所獲得的L型穩(wěn)定程度往往與在含有誘導劑的培養(yǎng)基中的傳代次數有關。穩(wěn)定L型的形成可能是由于細胞壁成分完全缺失，細菌失去了為新細胞壁合成的引物，也可能是由于誘導因素長期存在，細菌發(fā)生了基因突變，產生的細胞壁缺陷株經抗生素的選擇，即可獲得穩(wěn)定的L型［2］。隨傳代次數的增加，淋球菌L型的生化反應發(fā)生了一定程度的改變，提示由于細胞壁的缺陷，使嵌于細胞壁膜上的酶發(fā)生丟失［2］。

由于細胞壁的缺陷，L型對作用于細胞壁合成的抗生素敏感性降低。由于L型細胞壁的不完整而通透性變大，故對作用于胞質內蛋白質及脫氧核糖核酸合成的抗生素的敏感性增加［2］?；貜椭旰驮哪退幮越咏?/p>三株淋球菌L型在-25℃下保存20天未死，且能在平板上復蘇相當數量的菌落，說明采用該方法保存淋球菌L型有效保存期為20天。

參考文獻

1關超,湯秀蘭,張正銀,等.L型淋球菌性前列腺炎63例報告.中華泌尿外科雜志,1994,15∶125.

2林特夫.細菌L型的生物學性狀與致病性.見:黃谷良主編.細胞L型與疾病.北京:學苑出版社,1991.66-68.

3葉順章.性病實驗檢查技術.見:葉干運主編.實用性病學.北京:人民衛(wèi)生出版社,1991.218-220.

（責任編輯：zxwq）

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