泌尿生殖道支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷研究

文章內(nèi)容：/一2一_九九二湖南微生物學(xué)通311,）第一期泌尿生殖道支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷研究吳移謀（衡陽醫(yī)學(xué)最陽著鋒學(xué)教研室,衡陽市）（衡陽醫(yī)學(xué)院屯鏡室,銜陽市）6',3摘要用牛心消化液作基礎(chǔ)培養(yǎng)基.舔加小牛血侍,自制新鮮酵母浸潰.培養(yǎng)從尿道感染患者的中段碾.慢性前列嗥炎患者的前列腺渡中分離出來的尿素支原體（）^型支原體（）殛不育愚者精液中的.其中尿道感染者101倆,25蜘為陽性（24.5）,23例陽性（22.）;慢性前列腺捷05.仍陽性（20）."例陽性（".3）:不育者121側(cè).6例陽性（56.2）用掃描電鏡觀察.】呈卵圓形或球,直徑0.3--0.,.在液體培養(yǎng)基中.兩種支原體能分嗣分解尿素與精氟酸,產(chǎn)生-#在固體培養(yǎng)基上.低倍觀察菌落呈油煎蛋狀.適宜的分為60～6.5與.￡～.6邊宜的氣體為塒002.我們認(rèn)為與的實(shí)驗(yàn)室檢壹馥分兩步:首先在訊體培基上觀察典型的菌藩形態(tài).關(guān)鍵飼船碌生殖道支原體.泌雕生殖連感染.宴驗(yàn)奎診斷泌尿生殖道支原體包括尿索支原體（1）與人型支原體（）.它們主要寄生在泌尿生殖道,最常引起的疾病為非淋病性尿道炎.近年來認(rèn)為11的感染與慢性前列腺炎,男性不育,習(xí)慣性流產(chǎn),子宮頸炎等有關(guān),的感染與慢性前列腺炎,輸卵管炎等有關(guān).國內(nèi)報(bào)導(dǎo)甚少,為了明確病因,對(duì)癥治療,控制其傳播,作者等從性病,生殖門診收集診斷為泌尿生殖遘感染的標(biāo)本進(jìn)行了與的分離與培養(yǎng).現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)室診斷報(bào)告如下.材料與方法一,材料1.標(biāo)本:用無菌試管收集診斷為屎道感染者的中段屎,慢性前列腺炎按摩后的前列腺液或前段屎,不明原因不育者的精液或陰遭分泌物,3小時(shí)內(nèi)進(jìn)實(shí)驗(yàn)室檢查,尿標(biāo)本取10,200/離心分鐘,棄上清,沉渣作為按種物.2.培養(yǎng)基:新鮮酵母浸液的制備;從發(fā)酵面養(yǎng)基的柯氏瓶（90×155）,28℃培養(yǎng)3天后,用2無菌鹽水冼下,煮沸10分鐘,離心去沉渣,上清低磅滅菌低溫保存?zhèn)溆?配制:牛心消化液500,葡萄糖,氯化鈉5,0.1酚缸20,雙蒸水5001.11培養(yǎng)基加尿素1,調(diào)至5.5～6.0.培養(yǎng)基加精氨酸1,調(diào)至7.2～7.4.每瓶分裝74,低磅滅菌一25℃保存.使用前加入2小牛血清,1自制酵母浸液,青霉素2萬/,分裝于無菌試管（31）,固體培養(yǎng)基1.4瓊脂.二,方法1.培養(yǎng)方法:取標(biāo)本0.2接種子兩種液體培養(yǎng)基（不育者標(biāo)本只按種11培養(yǎng)基）,置37℃微氧環(huán)境（用裝有真空表,直徑為24高壓鍋,抽氣換氣法抽去5/6空氣,后補(bǔ)以9和%2）培養(yǎng)242小時(shí).每日觀察顏色變化,指示劑由黃色變?yōu)榉奂t色可能為1生長指征,由淡紅色變?yōu)樘壹t色可毹為生長指征.再轉(zhuǎn)種于固體培養(yǎng)基上.培養(yǎng)48小時(shí)后進(jìn)行低倍鏡下觀21非曼生輯察,如有典型菌落生長,作為陽性結(jié)果報(bào)告,如繼續(xù)培養(yǎng)至72&;,仍無菌落生長,視為陰性.2.分離鑒定:大小,形態(tài)與染色性,對(duì)底物的分解;菌落的形態(tài)特征對(duì)抗生素的敏感性.結(jié)果,1.分離結(jié)果共收集317份標(biāo)本,其中尿道感染者的中段尿標(biāo)本11份（男93女8）,能分解底物妁32份,轉(zhuǎn)種固體培養(yǎng)基后,25份為陽性（24.7）,23份為陽性（22.77）,8份雙陽性,其余5份為革蘭氏陰性桿菌,2份為類酵母樣真菌,慢性前列腺炎者的前列腺液或按摩尿液9份,能分解底物26份,0份為陽性（20,,14份為陽性（14.73）,5份雙陽性,7份為革蘭氏陰性桿菌,不明原因不育夫婦的精液及脂過分泌物121份,能分解尿素73份,68份為陽性（56.2）,5份為類酵母菌樣真菌.2.鑒定結(jié)果:兩種支體菌落純化后,轉(zhuǎn)種液休培養(yǎng)基,培養(yǎng)24時(shí)后,懸液涂片,革蘭氏染色為陰性,但著色較差,.一染色3小時(shí)呈紫藍(lán)色.11用日本產(chǎn),'掃描電鏡觀察菌體呈卵圓形,多單個(gè)或成雙排列,直徑0.3～.5,不里絲狀或長鏈?狀.鑒定結(jié)果見附表.附裹兩種支原體的鑒定培累支麻體討論317份泌尿生殖越感染的標(biāo)車,兩種支原體的分離結(jié)果與國外報(bào)道的基本一致.結(jié)果'齙明_奉實(shí)驗(yàn)所采用的分離方法是成功的.這些陽性患者多數(shù)有不潔的性生活史,多數(shù)夫妻雙方陽性并有不同程崖的臨床癥狀,經(jīng)四環(huán)素2/或強(qiáng)力霉素100,療程7～14天治療后,復(fù)查培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰,多數(shù)癥狀消除.泌尿生殖遭支原體的分離培養(yǎng)除一般基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)外,尚需豐富的膽固醇,血清蛋白和族維生素,對(duì)生長環(huán)境亦有一定要求,我們的體會(huì)是;1.酵母浸液:一般唇內(nèi)外分離培養(yǎng)支原體均采用市售酵母膏.我們采用自制酵母浸液,其培養(yǎng)的陽性率與菌落大小明顯優(yōu)于市售酵母膏.2.血清:國外報(bào)道馬血清分離效果好,我們用自抽新生小牛血清達(dá)到類似的效22果.3.兩種支原體生長對(duì)有一定的要求,尤其是在5.5～6.5生長繁殖較好.在液體培養(yǎng)基中,因分解尿素產(chǎn)堿,在生長繁殖高峰時(shí),上升最明顯,生長活力很快衰退以至死==.我們觀察培養(yǎng)基微紅時(shí),大約在6.4～6.8左右,應(yīng)轉(zhuǎn)種或傳代.4.氣體:兩種支腺體在固體培養(yǎng)基上,對(duì)氣體環(huán)境有一定的要求,國外報(bào)道在含5%和9%環(huán)境中培養(yǎng)生長較好.我們用自制裝有真空襲的高壓鍋,抽去5/6空氣,補(bǔ)進(jìn)與9%,兩種支原體生長較好.5.抑剜劑:為防止細(xì)菌與真菌妁污染,我們?cè)谂囵B(yǎng)基中添加大量青霉素2萬/1和兩性霉素50/1,基本可控制污菌現(xiàn)象.但兩性霉素能作用于膽固醇物質(zhì),可引起細(xì)胞膜破裂而死亡.我們?cè)趥鞔粫r(shí)發(fā)現(xiàn)加有兩性霉素的培養(yǎng)物有向濟(jì)現(xiàn)象,易失傳.從緒果中看出分解底物不一定都是支原體,如變形桿菌,腸桿菌,克雷伯氏菌儡單胞菌,普羅菲登斯苗和酵母蒂均能分解屎素,單憑顏色的變化不能鑒別,必須將分解底物的堵養(yǎng)物,再轉(zhuǎn)種于固體培養(yǎng)摹,根捃菌落的形態(tài)特征作陽性結(jié)果報(bào)告.術(shù)研究所采用的培養(yǎng)基系制,酵母浸液的制備也省去了繁瑣的除菌過濾而以低磅滅菌代之.培養(yǎng)方法采用自制高壓鍋,抽氣換氣法代替價(jià)格昂貴的與堵養(yǎng)輔;對(duì)于基層開展支原體方面的臨床檢驗(yàn)和科研工作創(chuàng)造了一個(gè)方便的條件參考文獻(xiàn)1.】0.一0:0.±:自【（上接第20頁）以上,18天內(nèi)蟲口減退率均達(dá)到了98.2一99.6,對(duì)照區(qū)蟲口密度上升了110.5.將三種制劑在5天,8天,12天及18天之間的蟲口校正減退率結(jié)果進(jìn)行分析.&;.01,說明病毒在